De nouvelles perspectives dans la caractérisation des protéines et des biopolymères grâce aux nouveaux développements du système de séparation Eclipse de Wyatt Technology

Wyatt Technology présente un nouveau canal de séparation pour son dispositif Eclipse™ qui permet d’analyser des protéines, des biopolymères et des suspensions colloïdales.

Eclipse représente une alternative aux dispositifs de chromatographie sur colonne et s’appuie sur le fractionnement par flux/force avec flux asymétrique (en anglais Asymetrical Flow Field Flow Fractionation – AFFF ou AF4). La séparation a lieu dans un canal sans phase stationnaire. Elle est provoquée par une interaction entre l’échantillon et un flux transversal qui s’échappe du canal par sa paroi inférieure tandis que l'échantillon est transporté vers l'orifice de sortie et les détecteurs, le long du canal. Les plus gros composants de l’échantillon sont éludés plus tardivement car ils sont transportés plus lentement à proximité de la paroi inférieure du canal. L’avantage consiste à séparer les fractions de haut poids moléculaire ou particulaires de manière efficace, lesquelles sont éludées sans être séparées sur une colonne dans le volume d’exclusion, et peuvent aussi être facilement absorbées dans la phase stationnaire ou dégradés par l’action de forces de cisaillements.

Le système Eclipse est déjà utilisé par toutes les grandes entreprises pharmaceutiques du monde pour la caractérisation de préparations d’anticorps. La FDA exige par ailleurs une vérification des résultats d’analyse en GPC par une méthode indépendante et recommande pour cela l’AF4. Il s’agit à cet égard de prouver l’absence d’agrégats et la stabilité de la formulation des protéines.

Wyatt Technology présente un nouveau canal de séparation pour Eclipse permettant d'obtenir une meilleure résolution parallèlement à une augmentation de la concentration de l'échantillon au niveau du détecteur. Les pics du chromatogramme sont élués plus rapidement et mieux résolus, ce qui entraîne une augmentation correspondante du rapport signal/bruit. La quantité d’échantillon injecté peut être réduite, ce qui permet d'économiser les matériaux d'échantillons précieux, et augmente la sensibilité de mise en évidence des produits dérivés, d’oligomères ou/et des agrégats.

Le nouveau design miniaturisé du canal avec un volume d’éjection réduit représente l’aboutissement de travaux de développement intensifs. Outre les avantages de la résolution et des pics plus élevés, l’emploi d’une moindre quantité de solvant et les temps d’analyse réduits figurent parmi les points forts de cette nouveauté. Le nouveau canal, plus petit, est plus facile à manipuler et nécessite un temps d’équilibrage plus réduit, ce qui, associé au temps d’analyse plus rapide, augmente sensiblement le débit d’analyse d’échantillons ou la collection de leurs fractions.

Les avantages de la nouvelle technologie à canal ne peuvent être obtenus qu'avec des réglages sans pulsation du canal et du flux transversal, comme cela est possible avec le système Eclipse, car il est le seul dispositif AF4 ne nécessitant qu'une seule pompe HPLC. Les variations de flux fausseraient gravement le signal au niveau des pics élevés et précis.

Grâce à ce nouveau dispositif ainsi qu’à la nouvelle génération de détecteurs MALS (détecteurs à diffusion de lumière laser multi-angles) de Wyatt Technology, les dispositifs HELEOS et TREOS, la caractérisation des protéines et des biopolymères est désormais possible au niveau du nanogramme.

Pour plus d’informations sur les services et les innovations récentes de Wyatt Technology, veuillez consulter le site www.wyatt.com ou envoyer un message à l’adresse wtf@wyatt.com.